大益集团微生物研发中心自2013年成立以来，一直致力于微生物发酵茶及其代谢产物的研究，并持续与国内多家科研院校开展项目合作。
TeadenolB是普洱熟茶的特征化学成分，仅存在于一些特定的微生物发酵茶中！
大益集团微生物研发中心于2014年从微生物发酵茶中提取了TeadenolB，随后与武汉大学药学院进行合作研究。在对TeadenolB进行的生物活性检测过程中，我们首次发现其对乳腺癌细胞表现出显著的抑制作用！
后续开展了一系列的细胞、蛋白质组学和动物试验研究，以探究其在防治乳腺癌肿瘤中的作用和相关机制。
现已完成TeadenolB的细胞和动物试验研究，研究发现：TeadenolB对四种不同临床亚型特征的乳腺癌细胞均有明显的抑制作用，并通过促进自噬来抑制乳腺癌。
这一发现为饮用发酵茶预防乳腺癌提供了新的证据，并强调了TeadenolB作为乳腺癌防治新治疗选择的潜力。
文章刊发于《Molecules》杂志，影响因子4.6。
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了解乳腺癌
乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤疾病，全世界有超过100万女性受到这种疾病的影响，在世界范围内的病例数量明显增加，且患者趋于年轻化。
临床上通常将乳腺癌分为LuminalA（ER+/PR+/HER2-）、LuminalB（ER+/PR+/HER2+）、HER2阳性型（ER-/PR-/HER2+）和三阴型（ER-/PR-/HER2-）。
其中三阴性乳腺癌具有有丝分裂率高、淋巴细胞浸润率高、分级高、肿瘤体积大、复发率高、死亡率高的特点，是目前临床治疗预后最差的一类乳腺癌，急需开发新的治疗方法。
根据临床肿瘤亚型的不同，主要包括以下三种疗法：内分泌治疗、抗HER2靶向治疗和化疗。目前治疗乳腺癌的临床药物易产生耐受性以及对身体的副作用较大而使治疗效果不佳，为此开发安全有效的新型乳腺癌防治药物至关重要。
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普洱熟茶的特征化学成分-TeadenolB
普洱熟茶是一种微生物发酵茶，在维持身体健康方面可发挥积极作用，具有抗疲劳、降血脂和预防癌症的作用。
它含有许多生物活性物质，主要是多酚、儿茶素、黄酮类化合物、酚酸、茶色素、皂苷、多糖、生物碱、维生素、氨基酸、有机酸等已被研究和报道的化学成分，且大多数物质为茶叶共有物质，只有极少数化合物被报道为仅能从普洱熟茶中分离得到。
TeadenolB（图1）是普洱熟茶的特征化学成分，最早在2011年由日本学者公开，分离自曲霉属真菌发酵茶叶代谢产物，并被报道其具有脂联素分泌促进活性和蛋白酪氨酸磷酸酶1B表达抑制活性。
图1TeadenolB的化学结构
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TeadenolB通过促进自噬抑制乳腺癌
文章研究结论总结如下：
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抗乳腺癌细胞活性筛选过程中发现TeadenolB对包括三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231在内的四种对应不同临床亚型特征的乳腺癌细胞都表现出了抑制作用，其中对MDA-MB-231、MDA-MB-453、BT474这三种乳腺癌细胞的抑制作用更强，对于MCF-7这种乳腺癌细胞的抑制作用稍弱。
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基于细胞实验、蛋白质组学研究发现TeadenolB干预作用下差异最显著的细胞信号途径为代谢通路（Metabolicpathways,hsa01100）。
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运用裸鼠移植瘤动物模型研究了TeadenolB对MDA-MB-231三阴乳腺癌移植瘤的大小、生长状况的干预作用，实验结果表明其对裸鼠的乳腺肿瘤的生长具有显著抑制作用，对裸鼠体重则无明显影响，表明TeadenolB能够抑制MDA-MB-231三阴性乳腺癌移植瘤，且无明显毒性反应。
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基于蛋白质组学实验的机制研究表明TeadenolB作为自噬启动子通过下调DCTD蛋白水平，进而抑制MDA-MB-231细胞生长。
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研究展望
研究普洱茶中特征化学成分的生物活性是开展普洱茶功效机制研究的基础！
大益集团多年来坚持科研投入，革新普洱茶发酵工艺，研究普洱熟茶功能成分的初心，就是为了给消费者提供更加健康的普洱茶产品！
经过多年研究，大益集团开发了“益原素”系列健康茶产品。每一款产品的健康物质基础就是来自于微生物发酵茶中的有益活性成分！
茶有益，茶有大益！大益未来会继续坚持“茶科研”的投入与创新，为行业发展及消费者健康带来助力！
安化黑茶是采用湖南雪峰山脉茶区大中叶群体品种的鲜叶，经过杀青、揉捻、渥堆、松柴明火干燥等四大工艺加工而成，具有色泽黑褐油润，滋味醇和或微涩，汤色红明艳亮，略带独特松烟香品质特征的毛茶及以其为原料蒸压成形的紧压茶总称。
安化黑茶具有多种对人体有益的保健功能，而这些生理保健功效主要是由茶多酚、茶多糖及茶色素等起着主要作用。安化黑茶的生理保健功能被人们所熟知，例如抗氧化、清除氧自由基、降脂、调节脂代谢、降糖、调节糖代谢、保护心血管、抗肿瘤作用、抗菌抑菌作用等生理活性功能。
最新研究报道，安化黑茶提取物有可能还具有生理抗炎的作用，但是具体作用机理机制暂时处于初级研究阶段。炎症性肠病(inflammatory bowel diseases，IBD)，广义的解释包括各种的肠道炎性疾病，一般来说是累及回肠、直肠、结肠这些的都可以称作炎症性肠病，它的表现一般都是腹泻、腹痛，甚至有些人可以出现血便的症状。炎症性肠病主要包括,溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)和克罗恩病。溃疡性结肠炎(UC)是一种能够致使直肠和/或结肠发炎并可以伴随溃疡的疾病，具体发病原因还不明确，但已有研究证实促炎和抗炎细胞因子的分泌失衡，在UC发病及病情发展中产生着重要的作用。
通过建立葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的ICR小鼠结肠炎模型，探讨安化黑茶对肠炎的潜在保护作用及分子机理研究，为功能性食品的开发提供科学的理论基础。安化黑茶对DSS诱导ICR小鼠结肠炎的抑制作用ICR小鼠连续饮用3%DSS 7 d诱导溃疡性结肠炎，用安化黑茶提取物灌胃，评估安化黑茶的抗炎作用。实验中可以观察到DSS组小鼠体重减轻明显，毛色暗淡，精神萎靡，其排泄物肉眼可见血性粘液，腹泻症状严重，与空白组小鼠DAI评分相比，DSS组小鼠DAI评分明显提高(p<0.01)。实验小鼠灌胃安化黑茶提取物后，可以观察到上述病症得到明显的缓解。与DSS损伤组相比，高剂量安化黑茶提取物和低剂量安化黑茶提取物组的小鼠均能缓解ICR小鼠体重的下降，降低粪便隐血发生率，减少腹泻次数，且高剂量浓度安化黑茶提取物组作用效果更加明显。DSS组小鼠结肠肠壁明显增厚,肠粘膜出现严重的充血、水肿；相对于对照组，小鼠结肠长度明显缩短(P<0.01)；相对于对照组，髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)和丙二醛(malonaldehyde，MDA)活性明显增高，而安化黑茶提取物灌胃的两个浓度组小鼠MPO和丙二醛浓度明显下调(p<0.01)；同时，安化黑茶提取物灌胃小鼠结肠壁未有明确增厚和结肠黏膜充血症状得到有效的改善。
安化黑茶可以改善溃疡性结肠炎小鼠免疫系统紊乱，降低结肠组织中MPO和MPO的含量，减少小鼠结肠炎症组织的损伤。相对于对照组小鼠，DSS组小鼠结肠组织炎症因子TNF-α、IL-lβ和IFN-y mRNA的相对表达水平明升上升，而补充安化黑茶提取组小鼠结肠这些炎症因子则受到明显抑制；采Western blot技术分析小鼠结肠炎症因子蛋白表达水平，其结果与RT-qPCR技术分析结果基本一致;进一步采用免疫组化技术，确定补充安化黑茶提取组小鼠结肠组织炎症因子表达下降，提示安化黑茶能抑制DSS诱导的小鼠结肠炎症组织炎症因子的表达。安化黑茶抑制LPS诱导巨噬细胞的炎症及炎症因子表达巨噬细胞RAW264.7在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激的炎症体外模型,采用安化黑茶提取物处理，在细胞水平确定其是否具有抗炎作用及可能的分子机理。安化黑茶对LPS诱导RAW264.7细胞毒性影响。不同浓度的安化黑茶提取物处理RAW264.7细胞24 h后，发现各组细胞数量排列密集，形状呈梭状，生长状态良好，细胞状态无明显差异。采用MTS法检测对照组，安化黑茶组OD值之间无显著差异(p>0.05)。说明0～100μg/mL范围内，安化黑茶提取物对RAW264.7细胞无明显的细胞毒性，对其生长、状态及活性无影响，可用于后续实验研究。安化黑茶对LPS诱导RAW264.7细胞炎症因子表达的影响。分别采用RT-qPCR和Western blot比较各组细胞炎症基因表达差异。相对于对照组，LPS组细胞促炎因子TNF-α、IL-1β和IFN-γ的mRNA表达量和蛋白表达明显上升；相对于LPS组，安化黑茶提取物能够明显降低炎症因子的表达，且呈明显的量效关系。安化黑茶对LPS诱导RAW264.7细胞中转录活性的影响。核转录因子(nuclear transcription factor-KB，NF-κB/p65)是调控炎症因子表达的重要转录因子，TNF-α、IL-1β和IFN-γ基因启动子区域均存在一个或多个NF-κB的结合位点。分别利用荧光素酶报告基因技术，研究安化黑茶对NF-κB活性的影响。
结果发现：与对照组相比，LPS诱导组细胞NF-κB相对荧光素酶活性(relative fluorescence intensity，RLU)显著升高；而安化黑茶提取物组细胞中RLU值显著减少，呈剂量依赖性，提示安化黑茶提取物可能通过抑制NF-κB的活性，从而抑制炎症因子表达。
安化黑茶提取物对DSS诱导的小鼠结肠炎症具有抑制作用，它能明显改善小鼠的炎症症状；安化黑茶提取物能下调关键炎症因子TNF-α、IL-lβ和IFN-γ的表达，其作用的分子机理可能与安化黑茶提取物抑制NF-κB的活性相关。
资料来源：中南林业科技大学硕士学位论文
茶皂素是一类齐墩果烷型五环三萜类糖苷化合物，是茶树体内重要的次级代谢产物之一，主要存在于茶树根、果实及花中。已有研究表明茶皂素具有抗氧化、抗炎、抑菌、抗肿瘤等多种生物活性。卵巢癌被认为是妇科三大癌症之一，是一种发病率和致死率极高的女性疾病。然而，茶皂素对卵巢癌细胞及其干细胞抑制活性的研究报道极少。浙江大学茶叶研究所2014级博士生贾玲燕同学在她的博士学位论文答辩现场，为我们详细介绍了三年多的时间里，她在茶籽皂素对人卵巢癌细胞的抑制作用及机理研究，及单体Theasaponin E1对卵巢癌干细胞的抑制活性方面所取得的研究成果，为茶籽皂素及其单体的活性研究提供了新的证据。
图 1. 研究路线
主要研究结果如下：
1.研究发现茶籽皂素对卵巢癌细胞OVCAR-3和A2780/CP70具有显著抑制活性。且相同浓度下，茶皂素对正常上皮细胞IOSE-364的毒性明显低于癌细胞。茶皂素存在剂量依赖性诱导癌细胞凋亡作用。
2.研究对比了三种茶皂素单体Theasaponin E1、Theasaponin B5、Theasaponin E4抗卵巢癌活性，Theasaponin E1>Theasaponin E4>Theasaponin B5。鉴于Theasaponin E1纯度和得率最高且活性最强，选其作为后续研究的实验材料。
图 2. 三种茶皂素单体的结构图
3. Theasaponin E1可以在剂量和时间上依赖性抑制A2780/CP70细胞体外增殖活性和单细胞克隆能力。一方面通过外凋亡途径诱导癌细胞凋亡；另一方面通过引起细胞周期G1期阻滞。
4.研究选取卵巢癌顺铂耐药细胞株OVCAR-3和A2780/CP70，ALDH作为干细胞表面标记物，无血清悬浮培养法富集干细胞，建立了ALDH阳性卵巢癌干细胞样群模型。该模型细胞干细胞成球能力显著提高，细胞迁移能力显著增强，干细胞特性蛋白CD44、Nanog、Oct-4，以及抗凋亡蛋白Bcl-2，肿瘤细胞迁移和侵袭相关蛋白MMP-9表达显著上调。采用该模型研究Theasaponin E1对ALDH阳性卵巢癌干细胞的抑制活性，结果显示Theasaponin E1可明显抑制ALDH阳性卵巢癌干细胞体外增殖活力，降低无血清条件下成球能力。
图3. Theasaponin E1对ALDH阳性卵巢癌干细胞细胞活力的影响
图4. Theasaponin E1对ALDH阳性卵巢癌干细胞成球能力的影响
